Что такое анализ ПЦР?

На сегодняшний день выявлено множество инфекционных заболеваний, возбудители которых моментально приспосабливаются к меняющимся условиям, из-за чего их диагностика затрудняется. Поэтому одновременно с уже привычными морфологическими, биохимическими и иммунологическими методами врачи активно внедряют новейшие разработки в диагностику, чтобы получить еще более точные результаты. За открытие полимеразно-цепной реакции американский ученый К. Мюллис получил Нобелевскую премию.

Что это за исследование?

Метод ПЦР считается одним из уникальных методов молекулярной биологии, обладающих высочайшей точностью.

Технология позволяет увеличить в сотни раз в биоматериале участок ДНК возбудителя патологии. Таким способом можно выявить даже одну чуждую ДНК. В основе теста лежит многократное удвоение какого-либо сегмента ДНК ферментами. В результате увеличения количества ДНК становится достаточно для точной идентификации. Копируется при этом только участок удовлетворяющий заданным требованиям. Полученные фрагменты сверяются с базой данных, выявляется тип возбудителя и его концентрация.

ПЦР позволяет в самом маленьком объеме материала обнаружить присутствие возбудителя и начать курс терапии как можно раньше.

Достоинства и недостатки исследования

У ПЦР тестов много преимуществ перед традиционными способами:

• высокая чувствительность — патологичный возбудитель выявляется даже на самых начальных этапах болезни, при её хронической форме и при латентном протекании болезни;
• универсальность — определить возбудителя можно в любом биоматериале: в крови, в слюне, в соскобе с кожи;
• высокая специфичность — определяется последовательность нуклеотидов, характерная лишь для конкретного возбудителя. Специфичность ПЦР достигает 100%;
• широкий охват — в одном образце можно выявить нескольких возбудителей;
• быстрота — результат бывает готов уже через 5–7 часов;
• точность — способ практически не дает ложноположительных/отрицательных результатов при точном соблюдении технологии исследования;
• доступная стоимость — анализ крови ПЦР не дороже других исследований.

Этот тест нуждается в соблюдении строгих норм оснащения лаборатории. Например, в лаборатории должен находиться биофильтр со степенью очистки не менее 99,9%. Это необходимо потому что в воздухе постоянно летают множество фрагментов посторонних ДНК, которыми может загрязниться исследуемый фрагмент.

Посмотрите видео на эту тему

Какие болезни и инфекции может диагностировать?

При помощи ПЦР анализа можно выявить:

• ВИЧ;
• герпес;
• ИППП — хламидиоз, микоплазмоз, гарднереллез и пр.;
• кандидоз;
• гепатиты;
• туберкулез;
• ВПЧ;
• листериоз;
• мононуклеоз;
• цитомегаловирус;
• клещевой энцефалит;
• энтеровирус;
• краснуху;
• опоясывающий лишай.

Разновидности

Существует достаточно много разновидностей ПЦР: в реальном времени, RPA, вложенная, инвертированная, асимметричная, с обратной транскрипцией, ступенчатая, длинных фрагментов и пр. Наиболее часто используется техника ПЦР в реальном времени — при исследовании этим способом практически не бывает ложных положительных заключений, вдобавок срок обработки биоматериала сокращается до нескольких часов.

ПЦР на инфекции

ПЦР активно используется для диагностирования ЗППП. Коварство этих недугов проявляется в том, что симптоматика преобладающего количества стерта, особенно на начальных этапах инфицирования. Выявить возбудителя при помощи классических анализов сложно.

Когда же симптомы проявляются, лечение будет более длительным. Поэтому исследование рекомендуется проводить при первых подозрениях на инфицирование. ЗППП опасны тем, что они отрицательно влияют на здоровье партнерши и на ее потомства. Сдать ПЦР на ЗППП рекомендуется молодым супругам перед зачатием.

ПЦР во время беременности

Большинство заболеваний у женщин, ожидающих ребенка, протекает без симптомов и принимаются за недомогания. Для выявления скрытых инфекций рекомендуется проводить ПЦР до 12-ой недели беременности, чтобы была возможность лечения до родов.Через три недели после терапии проводится повторный анализ для оценки его эффективности. ПЦР-проба используется для определения ограниченного перечня инфекций:

• токсоплазмоза;
• трихомониаза;
• кандидоза;
• микоплазмоза;
• хламидиоза;
• гонореи;
• герпеса;
• гепатита;
• ВИЧ и пр.

Важно понимать, что болезненная микрофлора беременной может вызвать:

• дефекты развития эмбриона;
• прекращение беременности;
• вызвать ранние роды.

Для диагностики ВПЧ

ПЦР — самый, пожалуй, распространенный метод диагностики для выявления ВПЧ особенно онкогенных типов. Некоторые исследователи считают, что больше 80% населения мира инфицированы этим вирусом. В качестве материала для анализа берется мазок со слизистой, в некоторых случаях — кровь, моча или околоплодные воды. ПЦР-анализ позволяет не просто выявить ВПЧ, но и уточнить тип инфекции.

Метод позволяет точно посчитать даже количество вируса в предоставленном материале. Цифра в бланке показывает количество геномов на 100000 клеток.

Если вируса нет, в заключении будет слово — отрицательный. Если он присутствует, то в результатах будет прописана его концентрация.< 3 — вирус есть, но его мало, 3–5 — клинически значимый результат, > 5 — высокая вирусная нагрузка.

Для диагностики ВИЧ

Известные тесты ПЦР для диагностирования ВИЧ чувствительны лишь в 96-98%, что принципиально меньше, чем при сдаче ИФА (99,9%). Поэтому их нельзя использовать для подтверждения диагноза. Неудачный подбор праймеров (используемых ингредиентов) может приводить, например, к тому, что тест выявит субтип B вируса иммунодефицира и не выявит субтип A и G и пр. Преимущество ПЦР состоит в том, что тест может выявить вирус в инкубационном и в раннем периоде, когда еще нет антител. Однако, тест реже показывает инфицированных в позднем периоде.

Главным отличием ПЦР теста можно считать тот факт, что тест выявляет не антитела (которых еще часто нет), а наличие непосредственно самого вируса. Поэтому ПЦР можно назвать оптимальным способом, если требуется преждевременное выявление ВИЧ.

Для диагностики гепатитов

ПЦР проба на гепатит C, B, G, D – самый эффективный сегодня метод для определения вируса. ПЦР решает задачи:

• диагностирует инфекции на начальных стадиях;
• указывает на отсутствие вирусов при неопределённых результатах ИФА;
• выявляет истинных вирусоносителей среди людей с антителами;
• позволяет выяснить генотип вирусов гепатита С;
• провести количественный анализ ДНК вируса.

Комплексное обследование

Комплексный ПЦР-анализ на 6-20 инфекций рекомендуется в тех случаях, когда человек подозревает, что он мог заразиться, но не знает чем.

Комплексный анализ будет полезен парам, планирующим ребенка, и людям часто меняющим сексуальных партнеров. Комплексное обследование поможет выявить возбудителей уреаплазма, ВПЧ, кандида, микоплазмы, хламидии, герпеса и пр.

Подготовка к исследованию

Подготовка зависит от того, какой биоматериал нужно сдать.

1. Анализ крови на ПЦР сдается натощак, после, как минимум, 4-х часового воздержания от еды. За час до кровосдачи нельзя курить. За 2 дня нужно исключить физнагрузки, алкоголь и жирные, жареные продукты из рациона.
2. Сдаче мочи не должна предшествовать антибиотикотерапия. Накануне нельзя ограничиваться в питье и не пить чересчур много питья, чтобы не была повышена/понижена её концентрация. Не злоупотреблять окисляющими мочу продуктами (мясо, фрукты) или ощелачивающими (бобовые, овощи). Необходимо исключить накануне сексуальные контакты. Перед сдачей мочи подмыться только водой без мыла. Женщинам — не сдавать мочу в течение 5 дней после проведения трансвагинального УЗИ и кольпоскопии. Мочу нельзя сдавать в период менструации.
3. Перед сдачей мазка нужно воздержаться от секса в течение 36 часов. Перед мазком нельзя подмываться и мочиться (с момента посещения туалета должно пройти больше 3 часов). Мазок женщинам нельзя сдавать во время кровотечений и месячных. Для более высокой достоверности мазок берут или за несколько дней до менструации или сразу после. В день сдачи нельзя спринцеваться и ставить вагинальные свечи. Если анализ проводится для контроля антибиотикотерапии после лечения должно пройти не меньше 21 дня.
4. Перед сдачей мазка из рото- и носоглотки за 2-4 часа нельзя кушать, в течение часа нужно воздержаться от курения. С утра не нужно чистить зубы, полоскать рот, промывать носовые ходы. Также нужно воздержаться от применения капель, спреев и аэрозолей.

Как проводится?

Кровь сдается из вены с использованием вакуумных систем.

Мочу нужно собрать в стерильный контейнер и в течение часа доставить в лабораторию. Транспортировку контейнера нужно осуществлять только при плюсовой температуре.Мазок берется из уретры у мужчин и из влагалища, мочевого канала и шейки матки у женщин. Мазок берется специальным зондом, не повреждающим слизистую.

Какой материал исследуется?

Биоматериалом для ПЦР проб служат:

1. Эпителиальные соскобы берутся для определения наличия ЗППП, герпетических и иных инфекции, поражающих эпителиальный слой.
2. Моча необходима для исследования при инфекциях мочеполовой системы.
3. Мокрота берется для выявления туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза.
4. Кровь и плазма необходимы для исследования вирусов гепатитов, герпеса, ВИЧ.
5. Биожидкости — к ним относятся сок простаты, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости и пр.
6. Биоптаты желудка и ДПК для определения Helicobacter pylori.

Расшифровка и нормы

Расшифровка результатов не представляет сложности даже для неспециалиста, так как таблицы норм не существует. В заключении могут быть только два показателя:

• отрицательный – значит возбудитель, для выявления которого проводилась проба, не найден;положительный – найден;
• ПЦР может быть положительным даже в случае, когда симптомов не наблюдается. Это означает, что она протекает в начальной стадии или скрыто.

Точность диагностики

Тест отличается исключительной уникальной точностью. Анализ способен:

• точно определить наличие/отсутствие инфекции;
• идентифицировать её;
• обнаружить её при минимальном количестве ДНК возбудителей в биоматериале.

Где пройти исследования

Анализы на ПЦР в Москве выполняются медицинскими профильными клиниками, оборудованными соответствующими лабораториями, к которым относятся:

• Семейный Доктор;
• IQ-clinic;
• Вита;
• сети лабораторий Инвитро и Гемотест;
• Милта Клиник;
• МЦ Здоровье Основа Всего;
• Мед-диалог и пр.

Стоимость исследования на одну инфекцию колеблется от 200 рублей до 350. К стоимости исследования нужно прибавить стоимость забора материала. Как правило, при комплексном ПЦР стоимость одного исследования обходится дешевле.

Вывод

На сегодняшний день анализ ПЦР является наиболее точным и современным методом для выявления инфекций на самых ранних стадиях инфицирования. Одинаково эффективен он при обследовании и взрослых и детей.