Все методы определения группы крови

Определение группы крови является обязательным параметром для допуска и подготовки к различного рода оперативным вмешательствам. Анализ крови на определение группы важен для возможной ситуации, когда появляется необходимость в переливании реципиенту донорской крови, что особенно важно для военных и служащих схожих сфер.

Методы определения групповой принадлежности

Среди методов определения группы крови выделяют стандартный, метод перекрёстной реакции, при помощи цоликлонов и эритротеста-группокарты.

Стандартный

Наиболее популярный способ определения группы крови и Rh, в котором использованы стандартные сыворотки. В его процессе выявляются антигены системы АВ0. Сыворотки, используемые при этом способе, состоят из антител к частицам на эритроцитах. Если антиген присутствует, начинается агглютинация эритроцитов, что и приводит к результатам анализа.

Процесс анализа происходит путём проведения следующих манипуляций: в пробирку с раствором обычной соли примешивают плазму. Далее набирают в пипетку получившийся раствор и смешивают в другой пробирке с физиологическим раствором. Далее используется планшет, на котором заранее размещают сыворотки. Возле каждой сывороточной капли капают образец, впоследствии смешиваемый с диагностикумом.

В последнее время часто используется более современный способ с применением гелевой методики, в которой происходит коллаборация агглютинации и использования гелевой среды. Для этого применяются специальные диагностические карточки с микропробирками, в которых и содержится нужный гель. Он может иметь нейтральную среду или содержать антитела и реагенты. Далее микропробирки подвергаются центрифугированию, в процессе которого агглютинированные эритроциты оседают на поверхности колонки с гелем.

По прошествии времени выдержки (около 5-ти минут) анализируют результаты, которые могут быть следующими:

• Если агглютинация не наступила со всеми стандартными сыворотками – кровь I группы;
• Если агглютинация наступила только с сыворотками O(I) и B(III) — кровь II группы;
• Если агглютинация наступила только с сыворотками O(I) и A(II) – кровь III группы;
• Если агглютинация наступила со всеми тремя сыворотками — кровь предположительно IV группы, но велика вероятность панагглютинации. Поэтому анализ дополняют четвёртой сывороткой AВ0, если после этого агглютинация не происходит, кровь причисляют к IV группе.

Метод перекрёстной реакции

В данном способе определения группы крови используются как стандартные сыворотки, так и цоликлоны в смеси с эталонными эритроцитами. Её исполнение фактически идентично предыдущей технике, но с некоторыми поправками.

На планшетную поверхность для определения группы крови наносятся сыворотки, а после этого прибавляются эталонные эритроциты.

Выжидается время и анализируются результаты:

1. При наступлении агглютинации в двух каплях – группа I;
2. Если агглютинация не наступила ни в одной из капель – группа IV;
3. Если реакция наступила в каком-либо эталонном эритроците, далее группа определяется по свёртываемости в капле (её наличию или отсутствию).

Способ с применением цоликлонов

Данный алгоритм определения группы крови проводится зачастую в том случае, когда стандартные сыворотки неприемлемы или при исследовании крови другими способами возникли ошибки.

Температура в лаборатории не должна превышать 25 градусов, освещение должно быть обильным и правильно расположенным. Реагенты должны содержаться в закрытом состоянии, их высыхание уменьшает активность антител. Не используются мутные реагенты или реагенты с примесями. Для каждого реагента используется строго своя пипетка. Также для анализа применяется тарелка со смачиваемой белой поверхностью.

На планшетную поверхность наносят массивные капли цоликлонов с пометками об их виде, далее к ним прибавляют по капле крови и анализируют полученные результаты спустя 3-5 минут.

Расшифровка результата следующая:

• При отсутствии реакции агглютинации во всех полученных каплях, когда в наличии нет антигенов А и В — значение выставляется для I группы;
• При наличии реакции только в одной капле (анти-А), когда в наличии антиген А, значение выставляется для II группы;
• При появлении реакции только в одной капле (анти-В), когда присутствует антиген В, значение выставляется для III группы;
• При наличии реакции в обеих каплях, когда в наличии оба антигена, значение выставляется для IV группы, итоги перепроверяются.

Препараты, которые используются для данного анализа на определение группы:

1. Обычный анти-D-цоликлон, используется для непрямой реакции;
2. Супер-анти-D-цоликлон, используется для прямой реакции;
3. Анти-D-микс, совмещающий предыдущие два препарата, используется как для выявления группы, так и резус-фактора.

Посмотрите видео на эту тему

Эритротест-группокарт

Ещё одним способом определения группы крови является применение эритротестов.

Такой комплект можно приобрести в специализированной аптеке и использовать в домашних условиях.

Обычно в комплект набора входит планшет со специальными углублениями для образцов, скарификатор (игла для прокола пальца), стерильная пипетка, в которую происходит забор материала, и набор палочек из стекла для перемешивания содержимого лунок.

С помощью подобного теста можно определить не только принадлежность к группе крови, но и узнать свой резус-фактор.

Алгоритм определения группы крови данным способом построен на использовании вышеуказанных цоликлонов, заранее нанесённых на дно каждой лунки и высушенных для удобства использования. Подготовка набора для определения группы крови состоит в записывании данных исследуемого пациента, нанесении капель воды в каждую из лунок, чтобы привести реагенты в «рабочее» состояние. Далее у пациента забирается кровь и наносится в лунки, перемешивается входящими в комплект палочками. Предварительно кровь наносится на пустое место, не затрагивающее лунки, и уже оттуда разносится разными палочками в каждую лунку отдельно, чтобы избежать загрязнения реагентами и не допустить ошибок. Результаты сравниваются с содержащейся в тесте карточкой с возможными результатами спустя 3-5 минут. Далее можно записать результаты в карточку и сохранить её.

Помимо эритротеста для домашнего использования существуют и иные аппараты, помогающие в определении группы крови и резус-фактора, например, комплект для определения группы крови КГК 01, который также применим и для выявления совместимости крови донора с кровью реципиента.

Плюсы и минусы методов

Если говорить о каждом конкретном методе проверки группы крови, то можно выявить следующее:

• Плюс перекрёстного метода в его контрольной направленности, то есть он имеет особенность предотвращать главные ошибки при диагностировании группы крови другими стандартными способами;
• Плюс способа с применением цоликлонов заключается в его возможности применения в случаях, когда стандартные сыворотки не могут быть применены. Минус же заключается в сложности проведения, соблюдении всех условий для оптимального проведения процедуры;
• Эритротесты хороши тем, что доступны и для домашнего использования, но отрицательной их стороной считается неидеальная результативность, то есть итог может быть некорректным.

Среди них можно выделить минусы:

• Возможность ошибки – даже при проведении сложной и оправданной методики могут появляться ошибочные результаты.
• Обязательное соблюдение правил – многие методики должны проводиться в специальных условиях, требующих тщательной подготовки и соблюдения определённых параметров помещения, его температуры и влажности. Реагенты должны корректно храниться, что тоже накладывает свои трудности на практику проведения исследования.

Среди плюсов выделяют:

• Многие из данных методик точны, позволяют получить правильный результат с точностью до 100% (особенно это касается способа с применением цоликлонов).
• Быстрота выполнения – для проведения анализа и ожидания времени воздействия реагентов на кровь не уходит много времени, обычно продолжительность реакции составляет не более 5-ти минут.
• Возможность определения родства при анализе крови на принадлежность к группе.

Достоверность методик

В некоторых случаях при определении группы крови могут возникать ошибки, имеющие различный характер.

Технические ошибки:

1. Неправильное расположение реагентов — может нарушить корректность проведения анализа, так как спутаются все результаты. Перед применением важно изучить планшет с реагентами на наличие ошибок или некачественности самих реагентов.
2. Несоблюдение температурного режима – исследование проводится при температуре не выше 25 градусов и не ниже 15 градусов, так как в крови могут содержаться агглютинаты, склеивающие эритроциты при недостатке тепла, а при его избытке антитела А, В и АВ могут терять свою активность.
3. Нарушение количественного соотношения исследуемого материала и реагентов — приводит к ошибкам в результатах. Если количество эритроцитов значительно выше числа реагентов, агглютинация может пройти практически незаметно; если количества эритроцитов недостаточно, реакция проявляется слишком медленно и приводит к некорректной расшифровке результата.
4. Несоблюдение времени наблюдения — приводит к некорректной расшифровке. Реакция может появиться спустя 10-15 секунд, что может быть рассмотрено в качестве результата, но для точной результативности важно выждать не менее 5-ти минут, так как слабый антиген А характеризуется замедленной реакцией.
5. Несоблюдение подвижности смеси – при этом эритроциты могут осесть и дать неправильный результат при оценивании. Планшетную поверхность нужно постоянно покачивать.

Функциональные и другие ошибки:

1. При определении трудноопределимой группы крови могут появиться ошибки. Так как эритроциты А2 низкоагглютинативны, их определение может вызвать ряд сложностей и появление последующих ошибочных результатов.
2. Неспецифическая агглютинация эритроцитов – данное отклонение может наблюдаться у пациентов, страдающих анемией или иными аутоиммунными заболеваниями, у младенцев с гемолитическими патологиями.
3. Неспецифическую агглютинацию можно спутать со специфической, поэтому для проверки проводится проба с сывороткой АВ. Делается это для корректного подбора донора.
4. Наличие кровяных химер – эритроцитов, которые отличаются по показаниям, но находятся в одном кровяном русле. Возникает при частом переливании крови, у близнецов и после пересадки костного мозга.
5. При наличии определённых патологий (цирроз печени, сепсис, ожоги) может наблюдаться повышенная агглютинация, что спутывает результаты анализов. При лейкозе обратная ситуация – снижение агглютинабельности.

С помощью неё выявляется группа крови, патологии. Подобные анализы крови помогают сохранить многим людям жизнь, так как правильный подбор всех параметров крови — резус-фактора и группы — очень важен при переливаниях и проведении оперативных вмешательств.