Техника определения группы крови по системе AB0

В этой статье речь пойдёт о методах определения группы крови по системе АВ0, а также об экспресс-методе определения резус-фактора.

Сначала поговорим о целях определения группы крови, а также об истории изучения этого вопроса. Интерес к переливанию крови зародился давно. Ещё в Древнем Египте врачи пытались перелить её раненым, больным, умирающим. В основном использовали в качестве доноров молодых животных. Считалось, что они обладают особой природной силой и к тому же не подвержены порокам, как люди. Переливание от человека человеку было чаще всего безуспешным. Причины этого гораздо позже открыл австрийский врач Карл Ландштейнер. Он определил, что у человека находятся различные антигены и антитела, образующие особую иммунную систему.

По этой системе в состав крови входят:

• агглютиногены А и В (антигены). Локализация – эритроциты;
• агглютинины альфа и бета (антитела). Локализация – сыворотка.

Расположение их в крови:

• Антиген А вместе с антителами альфа;
• Антиген В вместе с антителами бета;
• Только антитела альфа и бета.

Одновременно одноимённые антигены и антитела находиться не смогут, так как их встреча приводит к бурному проявлению т.н. реакции изогемагглютинации, что приведёт к гемолизу (разрушению) эритроцитов и прочим патологическим реакциям.

• 1-я группа: отсутствуют агглютиногены, в сыворотке – агглютинины есть;
• 2-я группа: есть А и бета;
• 3-я группа: есть В и альфа;
• 4-я группа: есть А, В, агглютининов нет.

Техника определения

Техника определения группы крови по системе АВ0 основана на визуальном наблюдении агглютинации.

Проводить исследование нужно при:

• средней температуре воздуха 20°С;
• нормальной влажности;
• хорошем освещении;
• достаточном количестве времени на работу.

На специальном планшете пишут фамилию исследуемого. Сам планшет разделяется на 3 сектора, по часовой стрелке: 1-я группа, 2-я, 3-я. Затем так поступают со вторым планшетом. На столе должны находиться: 2 комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток 1-й, 2-й и 3-й групп. Эти комплекты должны быть разных серий, с наклеенными этикетками, неповрежденные, без осадка, храниться в холодильнике. Каждый флакон нужно проверить. Также должна быть сыворотка 4-й группы крови. Дополнительно рядом находятся: иголка или шприц, бинты, дезинфицированная вата, этанол, предметные стекла, флакон физиологического раствора.

Сделав прокол пальца (можно брать и из вены), сначала появившуюся кровь вытирают стерильной ватой, следующие капли наносят на предметное стекло, затем на эти три сектора тарелки. Перед этим в планшеты должны быть добавлены стандартные сыворотки из двух разных комплектов. Объём добавляемой крови должен быть меньше объёма сыворотки.

После этого добавляют физраствор, снова трясут, минут через пять делают вывод о группе крови в зависимости от следующих возможных результатов:

1. Агглютинации нет нигде. Значит, образец имеет 1-ю группу.
2. Агглютинация есть в секторах с 1-й и 3-й группой, нет — на 2-м секторе – исследуемый образец 2-й группы.
3. Реакция есть в 1-м и 2-м секторе, но нет на 3-м. Исследуемый образец – 3-й группы.
4. Реакция во всех трёх секторах, значит у человека 4-я группа. Но необходима дополнительная проверка со стандартной сывороткой 4-й группы. Если реакции и там нет, исследование точно.

Реакция гемагглютинации довольно характерна. Она имеет вид свернувшихся хлопьев, образовавшихся из белых комочков, быстро обесцвечивается.

Плюсы данной методики:

• Низкая стоимость;
• Распространённость;
• Надежность.

Минусы

• Сложность;
• Необходимость создания особых условий работы.

Определение моноклональными антителами

Для этого используют особые реагенты – цоликлоны. Они представляют собой клоны антител, полученных из клеточного гибрида, и способны вступать в реакцию с антигенами образца.

Техника проведения:

1. На планшете размечают два сектора: анти-А и анти-В;
2. На каждый сектор соответственно наносят каплю цоликлонов А и В;
3. Рядом с каплей размещают каплю анализируемой крови;
4. Перемешивают.

Трактовка результатов в соответствии с наступившей агглютинацией или ее отсутствием:

С Анти-А — С анти-В: Результат (группа крови)

• нет — нет: 1-я
• есть — нет: 2-я
• нет — есть: 3-я
• есть — есть: 3-я

Плюсы метода:

• Быстрота;
• Несложная трактовка результата;
• Лёгкая обучаемость персонала.

Минусы:

• Высокая стоимость.

Определение с помощью стандартных эритроцитов

Методика похожа на метод определения с помощью сывороток, но рядом на секторах наносят каплю реагентов стандартных эритроцитов – с заранее известными агглютиногенами, выделенными из донорской крови. Далее оценивают результат:

1. Агглютинация есть со стандартными эритроцитами 2-й и 3-й групп – исследуемый образец относится к 1-й группе;
2. Агглютинация есть со стандартными эритроцитами только 3-й группы  – исследуемый образец относится ко 2-й группе;
3. Агглютинация есть со стандартными эритроцитами только 2-й группы – исследуемый образец относится к 3-й группе;
4. Агглютинации нет нигде – исследуемый образец относится к 4-й группе.

Плюсы метода:

• Надежность;
• Изученность.

Минусы:

• Более высокая стоимость;
• Подходит большой оснащённой лаборатории;
• Необходимость обучения персонала.

Техника обнаружения наличия или отсутствия резус-фактора

Помимо группы крови, специфичным признаком крови является резус-фактор (Rh). Это особый белок, расположенный на эритроцитах.

Резус можно определить экспресс-методом. Суть заключается в следующем: на планшетке обозначают два сектора. Первый для сыворотки антирезус, второй для контрольной. Сыворотка представляет собой реактив с анти-Rh антигеном 4-й группы крови, разведённым в альбумине. Контрольная не содержит резус-фактор. Наносят обе капли из этих реактивов на эти сектора, затем добавляют кровь. Объемы должны быть равным. Палочкой размешивают, добавляют немного физраствора. Результаты:

• Агглютинация слева – кровь резус-положительна;
• Агглютинации слева нет – кровь резус-отрицательна;
• Агглютинация сразу в двух секторах – реакция сомнительна, необходимо перепроверить результат.

Возможные ошибки при проведении исследований

Технические:

• Нарушения климатического режима помещения;
• Слишком короткое время наблюдения;
• Слишком длинное время наблюдения;
• Осадок выпавшего фибрина;
• Неправильная организация работы.

Биологические:

• Некоторые заболевания, влияющие на физико-химический состав крови;
• Неспецифическая агглютинация;
• Свёртывание крови из-за выпадения фибрина;
• Наличие подгрупп крови у донора.

Ошибки, зависящие от особенностей эритроцитов:

• Слишком большая скорость агглютинации (из-за некоторых заболеваний – ожоговая болезнь, сепсис);
• Необычный состав эритроцитов (обычно генетически обусловленный);
• Неспецифическая агглютинация образца (при аутоиммунных заболеваниях, гемолитической болезни новорождённых);
• Снижение способности агглютинировать – при лейкозе;
• Присутствие кровяных химер – на разных эритроцитах разные антигены.

Ошибки, зависящие от сыворотки:

• Истёкший срок годности;
• Неправильное хранение;
• Маленький титр (должен быть 1:32);
• Возникновение феномена Томсена – неспецифической агглютинации. Встречается при попадании бактерий.

Ошибки, связанные с применением неполноценных стандартных эритроцитов и сывороток:

• Нарушение технологии проведения исследования;
• Ошибка в наклеивании этикетки и фасовки.

Другие ошибки:

• Некомпетентный персонал;
• Нарушения в заборе образца крови;
• Попадание в образцы крови вирусов, бактерий;
• Неправильное использование вспомогательных предметов – планшетов и др.

Определение группы крови показано на видео

Вывод

Определение группы крови по системе АВ0 — это один из самых частых видов исследований.

Накоплен большой опыт, отработаны различные методики в области анализа группы крови человека.